Visokovsebinska presejalna mikroskopija (HCS) združuje avtomatizirano fluorescenčno slikanje z napredno analizo slik za pridobivanje kvantitativnih, multiparametričnih podatkov iz visoko zmogljivih celic. Za razliko od običajne mikroskopije, ki običajno vključuje ročno ravnanje z vzorci in omejeno vidno polje, so sistemi HCS zasnovani tako, da hitro in ponovljivo preslikajo celotne plošče z več jamicami. Ti sistemi uporabljajo avtomatizirane mize, robotsko nadzorovano ravnanje s tekočino in napredno optiko (pogosto vključno s konfokalnimi tehnologijami ali tehnologijami vrtljivih diskov) za zajemanje slik visoke ločljivosti prek več kanalov. Nastale slike so obdelane z uporabo strojnega učenja ali algoritmov, ki temeljijo na pravilih, za količinsko opredelitev kompleksnih celičnih fenotipov, kot so spremembe morfologije, lokalizacija beljakovin ali stanje celičnega cikla. Ta integracija slikanja in analize omogoča raziskovalcem, da vzporedno preučujejo na tisoče eksperimentalnih pogojev, zaradi česar je HCS nepogrešljiva platforma za obsežno odkrivanje zdravil, funkcionalno genomiko in sistemsko biologijo. Mikroskop HCS omogoča sistematično, obsežno funkcionalno presejanje na celični ravni, kar omogoča hitro oceno učinkov genetskih motenj, kemičnih spojin ali okoljskih sprememb na pomembne biološke procese, kot so tvorba por v membranah, transport beljakovin in dinamika organelov. Za načrtovane poskuse mora mikroskop HCS združiti visoko prostorsko ločljivost (za reševanje podceličnih struktur, kot so kompleksi jedrskih por (NPC), membranske pore in beljakovinski agregati, vključeni v mitohondrijsko dinamiko in celično smrt) z minimalnim fotobeljenjem in nizko fototoksičnostjo, da se zagotovi možnost slikanja živih celic v daljših časovnih obdobjih. Hitre hitrosti zaznavanja so prav tako ključnega pomena za odkrivanje hitrih in prehodnih celičnih dogodkov. Številne predvidene aplikacije zahtevajo tudi visoko časovno ločljivost za vizualizacijo dinamičnih procesov, ne da bi pri tem ogrozile vidno polje ali celovitost signala. Eksperimenti zahtevajo tudi multiparametrično analizo po več fluorescenčnih kanalih, da se omogoči hkratno sledenje več celičnih dogodkov. Pomembno je, da sistem podpira svetlobno nadzorovano aktivacijo optogenetskih orodij in ponuja prilagodljivost za manipulacijo laserske moči in vzorcev osvetlitve, da se omogoči natančen prostorski in časovni nadzor obnašanja celic na izbranih interesnih področjih. Celoten sistem je brezhibno integriran, kar zagotavlja nemoteno delovanje, maksimalno prilagodljivost pri konfiguraciji in nastavitvi sistema, uporabniku prijazen vmesnik in optimalno izrabo prostora. Sistem ponuja tudi najvišjo stopnjo avtomatizacije, vključno s samodejno poravnavo slike, samodejnim odmerjanjem in odstranjevanjem tekočine za potopitev objektiva ter samodejnim upravljanjem plošč po vseh komponentah, vključno z odstranitvijo pokrova. Da bi dosegli hitro odkrivanje, je sistem opremljen z dvema kamerama. Za zagotovitev časovno učinkovitega slikanja ciljnih lokacij na ploščah Well lahko mikroskop združi hitro predhodno skeniranje z nizko ločljivostjo s slikanjem z višjo ločljivostjo in/ali slikanjem s časovnim zamikom območij, opredeljenih na podlagi navedenega predhodnega skeniranja (npr. za opredelitev nekaterih značilnosti ali redkih dogodkov). Ker večina poskusov, načrtovanih za ta mikroskop, temelji na večbarvnem obarvanju, lahko mikroskop učinkovito zavira krvni obtok in navzkrižno govorjenje, ne da bi moral nenehno spreminjati filter med pridobitvami.
Besedilo samodejno prevedeno v jezik brskanja
